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INHALTSVERZEICHNIS 3

1EINLEITUNG ____________________________________________14

1.1 LIPASEN ________________________________________________________14

1.1.1 ÜBERSICHT ___________________________________________________________________14

1.1.2 S

TRUKTUR UND REAKTIONSMECHANISMUS VON LIPASEN _______________________________16

1.1.3 R

EAKTIONEN MIT LIPASEN _______________________________________________________19

1.1.3.1 Hydrolyse____________________________________________________________________19

1.1.3.2 Veresterung und Umesterung_____________________________________________________20

1.1.4 A

NWENDUNG VON LIPASEN ______________________________________________________21

1.1.5 R

HIZOPUS LIPASEN _____________________________________________________________21

1.1.5.1 Allgemeines __________________________________________________________________21

1.1.5.2 Dreidimensionale Struktur der Lipase aus Rhizopus oryzae _____________________________22

1.1.5.3 Klonierung und Expression von Rhizopus Lipasen ____________________________________24

1.1.5.4 Verwendung von Rhizopus sp. Lipasen _____________________________________________25

1.1.5.4.1 Modifikation von Triacylglyceriden________________________________________25

1.1.5.4.2 Rhizopus sp. Lipasen in der organischen Synthese_____________________________26

1.1.5.4.3 Rhizopus sp. Lipasen in der Schutzgruppenchemie ____________________________28

1.2 EXPRESSIONSSYSTEME_____________________________________________29

1.2.1 ALLGEMEINES_________________________________________________________________29

1.2.2 V

ERWENDUNG VON PICHIA PASTORIS ALS EXPRESSIONSSYSTEM __________________________31

1.2.2.1 Entwicklung von Pichia pastoris zu einem Expressionssystem für heterologe Proteine________31

1.2.2.2 Protein-Produktion in Pichia pastoris ______________________________________________32

1.3 PROTEINREINIGUNG_______________________________________________34

1.3.1 KONVENTIONELLE PROTEINREINIGUNGSMETHODEN ___________________________________34

1.3.2 A

FFINITÄTSCHROMATOGRAPHIE___________________________________________________34

1.3.2.1 IMAC ____________________________________________________________________35

1.3.2.2 Proteinreinigung mit dem HisTag _________________________________________________36

1.3.2.3 Andere Tagsysteme ____________________________________________________________36

1.3.2.3.1 Hisactophilin _________________________________________________________36

1.3.2.3.2 HAT ________________________________________________________________37

1.3.2.3.3 ThioFusion ___________________________________________________________37

1.3.2.4 EGFP als Reporter für die Proteinreinigung _________________________________________38

1.3.2.5 Helicobacter pylori – Ausgangspunkt für die Entwicklung einer TagToolbox _______________38

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