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2. ERGEBNISSE 73

Anders verhält es sich bei der Thermostabilität. Hier zeigt sich, daß die ROL aus Pichia

pastoris deutlich stabiler ist, als die aus E. coli. Während die ROL aus E. coli schon bei 35 °C

deutliche Einbußen der Aktivität auf knapp über 60 % zeigt, ist bei der ROL aus Pichia

pastoris noch über 80 % der ursprünglichen Aktivität vorhanden. Dieser Unterschied bleibt

bei allen höheren Temperaturen bestehen. Während die ROL aus E. coli bei 50 °C keine

katalytische Aktivität mehr zeigt, liegt die der ROL aus P. pastoris noch bei ca. 50 %. Höhere

Temperaturen haben bei beiden Präparationen die vollständige Inaktivierung zur Folge.

2.3.3.4 Substratspektrum

Die Lipasen aus Rhizopus oryzae und Rhizopus delemar wurden in der Vergangenheit schon

teilweise charakterisiert, eine vollständige Untersuchung der Kettenlängenspezifität wurde

bisher jedoch nicht durchgeführt (Beer 1994, Beer, et al. 1996, Haas, et al. 1991, Haas, et al.

1992).

Tabelle 2.5: Kettenlängenspezifität der ROL aus P. pastoris und E. coli

Substrat Relative Aktivität(%)

E. coli

Relative Aktivität (%)

P. pastoris

Triacetin (2:0)

5 ± 13 ± 1

Tributyrin (4:0)

48 ± 3 30 ± 5

Tricaproin (6:0)

50 ± 5 42 ± 5

Tricaprylin (8:0)

114 ± 5 121 ± 4

Tricaprin (10:0)

104 ± 6 109 ± 4

Trilaurin (12:0)

16 ± 2 21 ± 2

Trimyristin (14:0)

9 ± 16 ± 2

Tripalmitin (16:0)

9 ± 16 ± 2

Tristearin (18:0)

7 ± 13 ± 1

Triolein (18:1)

100 ± 1 100 ± 1

Die Aktivität wurde auf die Aktivität gegenüber Triolein bezogen und diese wurde als 100 % definiert.

Die Kettenlängenspezifität wurde mit Emulsionen der entsprechenden Triglyceride in

Phosphatpuffer ermittelt (pH Stat, 20 mM Triacylglycerin, 30 °C, pH 8,1). Es zeigte sich eine

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